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克隆、表達新方法之Gateway技術
2015-8-18
來源:互聯網
點擊數: 16438          作者:未知
  • Gateway技術提供以下可能: 通過去除冗長的亞克隆步驟節省您的時間 同時將您的基因轉移到多個表達系統 在任何您選擇的系統――體外,細菌,酵母,昆蟲,或哺乳動物――分析表達 一、一種更好的克隆方法 Gateway技術能夠克隆一個或多個基因進入到任何蛋白表達系統(圖1)。這項強大的體外技術大大地簡化了基因克隆和亞克隆的步驟,而同時典型的克隆效率高達95%或更高。當Gateway技術提供以下可能: 通過去除冗長的亞克隆步驟節省您的時間

    同時將您的基因轉移到多個表達系統

    在任何您選擇的系統――體外,細菌,酵母,昆蟲,或哺乳動物――分析表達

    一、一種更好的克隆方法

    Gateway技術能夠克隆一個或多個基因進入到任何蛋白表達系統(圖1)。這項強大的體外技術大大地簡化了基因克隆和亞克隆的步驟,而同時典型的克隆效率高達95%或更高。當基因在目的表達載體之間快速簡便的穿梭時,還可以保證正確的方向和閱讀框。Gateway也有助于進行帶不同數目純化和檢測標簽蛋白的表達。

    圖1 Gateway技術的靈活性

    目的基因克隆進入門載體后,可以同時轉移目的基因到多個目的載體。

    Gateway利用了位點特異重組,所以在構建入門載體后,不再需要使用限制性內切酶和連接酶。一旦您擁有了一個入門克隆,就可以多次使用它,轉移您的目的基因到Gateway改造過的各種表達載體(目的載體)。

    此外,由于在重組時dna片段的閱讀框和方向保持不變,因而您不必再為新的表達克隆測序擔心。在使用每一種新的表達系統時,將會節省您更多的時間。

    二、一項強大而可靠的技術

    Gateway技術是克隆和亞克隆DNA序列的一項新穎的通用系統,便于功能基因的分析和蛋白質的表達。一旦進入這個多功能的操作系統,DNA片段可以通過位點特異的重組在載體之間轉移。

    Gateway技術是基于已研究的非常清楚的λ噬菌體位點特異重組系統(attB x attP →attL x attR)。BP和LR兩個反應就構成了Gateway技術(表1和圖2)。BP反應是利用一個attB DNA片段或表達克隆和一個attP供體載體之間的重組反應,創建一個入門克隆。LR反應是一個attL入門克隆和一個attR目的載體之間的重組反應。LR反應用來在平行的反應中轉移目的序列到一個或更多個目的載體。

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