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多肽的分離純化
2015-8-18
來源:互聯(lián)網(wǎng)
點擊數(shù): 21059          作者:未知
  • 多肽是人體自身存在而且必需的活性物質(zhì),它廣泛分布于人體各處,分子量在3000~1000Da之間,現(xiàn)在研究較多的多肽包括抗惡性腫瘤多肽、抗病毒多肽、抗菌肽、細胞因子模擬肽、診斷用多肽以及用于心血管疾病的多肽等等,多肽不僅可用作藥物,還可用作保健食品。

    多肽的來源

    多肽的來源有天然提取,合成肽和重組肽三種。大多數(shù)多肽都是化學合成的,只有非常少的多肽是來源于天然提取,更大的肽一般指超過25個氨基酸需要通過重組DNA的技術(shù)表達生產(chǎn)。

    Superdex Peptide 多肽分離純化專用

    Superdex peptide專門分離多肽類產(chǎn)品的高分辨率分子篩凝膠,分離的分子量范圍為100-7000Da,多肽的分子量大小恰好落在此范圍內(nèi),因此可以通過分子量的區(qū)別來進行分離。圖中展示的是用Superdex Peptide PE 7.5/300來分離不同分子大小的肽類。


    離子交換層析


    當分離的多肽帶有電荷的時候,可以選擇用離子交換的方法進行分離,通常離子交換會和RPC及凝膠過濾層析配合在一起去分離復雜的樣品,如酶解多肽片段或者合成多肽以及天然來源的多肽。下圖為通過Q sepharose HP分離兩個分子量差別很小的肽。顯示用陰離子交換分離X肽和其前體x-k肽,它們之間的差異是x-k在c端多了一個lysine。

    反相層析


    多肽耐有機溶劑,多肽的可溶性通常是pH依賴性的,有些多肽的分離需要在很高的pH值條件下才能成功分離,SOURCE RPC 是以最新技術(shù)合成的超低壓快速反相層析凝膠,在高pH值下依然非常穩(wěn)定,可提供高分辨的中度和精細純化。圖中顯示在堿性條件下用SOURCE 30 RPC分離檢測僅僅相差一個氨基酸的多個血管緊張肽。

    多肽提取小貼士


    · 多肽的紫外吸收通常在206nm-220nm,如果含有芳香族的基團,紫外的吸收最大值會在268nm-280nm.

    · Sephadex G-10通常用于對合成多肽的第一步脫鹽。

    · 上述不同的層析方法可以交替使用獲得更純的多肽。

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