一、定義
    間接競爭法的模型：包被抗原，用HRP-抗體與樣本一起加入。樣本中的Ag與Solid-Ag競爭HRP-Ab，固相吸附的HRP-Ab與樣本中的Ag濃度成反比。
    直接競爭法的模型：包被抗體，用HRP-抗原與樣本一起加入。樣本中的Ag與HRP-Ag競爭Solid-Ab，固相吸附的HRP-Ag與樣本中的Ag濃度成反比。
二、競爭法的理論基礎(chǔ)：是限量抗體。只有在限量抗體基礎(chǔ)上，兩種抗原才會形成競爭關(guān)系。
三、間接競爭法具備較高靈敏度原因。
    直接競爭法里，標(biāo)記抗原與待測抗原均是液相，與抗體的結(jié)合機(jī)會是一樣的，例如有1份標(biāo)記抗原與1份待測抗原競爭1份抗體，那么有50%的標(biāo)記抗原能與抗體結(jié)合，所以標(biāo)記抗原的相對結(jié)合率為50%。間接法里，固相抗原與抗體的接觸面積較小，固相抗原與待測抗原的結(jié)合抗體機(jī)會是不平等的，接近順序飽和法，即只有與待測抗原結(jié)合剩余的抗體才會與固相抗原結(jié)合，同樣有1份固相抗原與1份待測抗原競爭1份抗體時，基本上抗體會被待測抗原中和掉，與固相抗原結(jié)合的抗體非常少。固相抗原的相對結(jié)合率為0%。因此，間接法的抑制曲線斜率會大于競爭法。

    因為抑制率越大則斜率越大，從而靈敏度越大。（假設(shè)零管變異5%，以兩倍SD為靈敏度限，則為90%相對結(jié)合率，則間接法可以在較低的待測抗原濃度達(dá)到這一相對結(jié)合率，因此靈敏度要高。）
在進(jìn)行系統(tǒng)放大時，間接法一般可以使用酶標(biāo)二抗。因為二抗可以針對抗體的多個部位，所以存在放大效應(yīng)，從而能提高間接法的靈敏度。直接法一般難以進(jìn)行放大，常用的有生物素化抗原與酶標(biāo)親和素，但模式上似乎不存在放大效應(yīng)。
四、間接法的高靈敏度難以實現(xiàn)的原因：
    雙抗體夾心的免放（IRMA）模式剛出現(xiàn)時，也被模型證明靈敏度優(yōu)于競爭法的放免（RIA），原因也是較大的斜率，但是IRMA的高靈敏度一直到單抗發(fā)展后才得以實現(xiàn)。間接法的高靈敏度也有其實現(xiàn)的條件，其中有幾點最為可疑：
    固相抗原與液體抗體的結(jié)合位點問題。很多時侯小分子直接包被或多肽包被后與液體抗體結(jié)合位點受到干擾，親和力下降。一般小分子必須衍生后進(jìn)行包被，但仍可能導(dǎo)致親和力的下降。固相抗原與液體抗體的接觸面積較少，因此需要更長時間去達(dá)到平衡。競爭法的基礎(chǔ)在于限量抗體，即兩種抗原競爭有限抗體。在間接法里，由于抗原與抗體結(jié)觸面較少，除非無限延長時間，否則可能只有較少的抗體能被固相抗原捕獲，從而導(dǎo)致最終固相化的酶數(shù)量較少，最終的吸光度變低。而在直接法里，雖然接觸面是一樣的，但所有的抗體都在接觸面上參與反應(yīng)，所以最終固相化的酶要多一些。3）直接法時抗體先固相化，一般是FC結(jié)合聚苯乙烯，針對不同抗原位點的抗體都能與標(biāo)記抗原反應(yīng)。因此，參與競爭的是針對所有位點的多抗。而間接法時，固相抗原的位點受到影響，部分抗原位點會消失。這時侯，針對這些位點的抗體將只與待測標(biāo)本中的抗原反應(yīng)。待測標(biāo)本中的抗原需要先將這些抗體中和掉，剩余的抗原再與固相抗原競爭剩余的抗體。通過篩選與固相抗原結(jié)合力不變的單抗可以解決這一問題。象棋篩子象棋篩子